产品名称： 大鼠血管内皮细胞生长因子受体2（VEGFR-2/Flk-1）ELISA试剂盒

货号：  ZK-R3127

英文名称: Rat Vascuoar endothelial cell growth factor receptor 2,VEGFR-2/Flk-1 ELISA kit

品牌：子科生物ZIKER；

检测方法：酶联免疫分析检测法；

规格：96T/48T；

包装：盒；

有效期：6个月；

保存温度： 2-8℃;

应用范围：仅供科研研究实验使用，不可用于临床诊断使用；

可检测样品形式：血清/血浆/组织匀浆/细胞培养上清/相关生物液体。

一、检测范围、 OD值：具体请咨询在线客服 ，或者来电索要详细说明书！

二、需自备试剂和器材

1． 标准规格酶标仪。

2． 自动洗板机。

3.  37℃恒温箱。

4． 系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，最好用多通道移液器。

5． 使用中性 PBS 或 TBS 作为洗涤液。

6  蒸馏水。

7. 吸水纸。

三、样品的准备和保存

样品如果不立即分析，应分装后冷冻保存，且避免反复冻融。

细胞培养、组织匀浆、体液——离心去除沉淀，立即分析或分装后-20℃冷冻保存。

1.  血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2.  血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。

3.  细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4.  组织匀浆：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。

5.  保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，超过2个月冻存于-80℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

四、操作注意事项

1.  试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。

2.  实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。

3.  浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，最终结果乘以5才是样本实际浓度。

4.  严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。

5.  所有液体组分使用前充分摇匀。

五、洗板方法

1、手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1min后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5次。

2、自动洗板机：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。

六、实验详细操作程序

1.  从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.  设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；样本孔加待测样本50μL。

3.  样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；空白孔不加。

4.  除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.  弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.  每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

七、结果判断:

绘制标准曲线：在Excel工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。