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小鼠血管紧张素转换酶(ACE)ELISA试剂盒
产品名称: 小鼠血管紧张素转换酶(ACE)ELISA试剂盒
货号: ZK-M4792
英文名称: Mouse Angiotensin converting enzyme,ACE ELISA kit
品牌:子科生物ZIKER;
检测方法:酶联免疫分析检测法;
规格:48T/96T;
包装:盒;
有效期:6个月;
保存温度: 2-8℃;
应用范围:仅供科研研究实验使用,不可用于临床诊断使用;
可检测样品形式:血清/血浆/组织匀浆/细胞培养上清/相关生物液体。
一、检测范围、 OD值:具体请咨询在线客服 ,或者来电索要详细说明书!
二、需自备试剂和器材
1. 标准规格酶标仪。
2. 自动洗板机。
3. 37℃恒温箱。
4. 系列可调节移液器及吸头,一次检测样品较多时,最好用多通道移液器。
5. 使用中性 PBS 或 TBS 作为洗涤液。
6 蒸馏水。
7. 吸水纸。
三、样品的准备和保存
样品如果不立即分析,应分装后冷冻保存,且避免反复冻融。
细胞培养、组织匀浆、体液——离心去除沉淀,立即分析或分装后-20℃冷冻保存。
1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。
3. 细胞上清液:3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。
5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,超过2个月冻存于-80℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
四、操作注意事项
1. 试剂盒保存在2-8℃,使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象,水浴加热使结晶完全溶解后再使用。
2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。
3. 浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白;按照说明书操作时样本已经稀释5倍,最终结果乘以5才是样本实际浓度。
4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
5. 所有液体组分使用前充分摇匀。
五、洗板方法
1、手工洗板:甩尽孔内液体,每孔加满洗涤液,静置1min后甩尽孔内液体,在吸水纸上拍干,如此洗板5次。
2、自动洗板机:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。
六、实验详细操作程序
1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2. 设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;样本孔加待测样本50μL。
3. 样本孔先加待测样本10μL,再加样本稀释液40μL;空白孔不加。
4. 除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5. 弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
6. 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。
七、免责声明
1、试剂盒仅供研究使用,不得用于临床实验或人体实验,否则所产生的一切后果,由实验者承担,本公司概不负责。
2、严格按照说明书操作,实验者违反说明书操作,后果由实验者承担。
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