​线粒体和胞浆蛋白制备试剂盒

货号：ZK-PL3522

规格：50次 100次

描述：线粒体和胞浆蛋白制备试剂盒 (Mitochondria Isolation Kit)用于从组织或培养细胞中分离线粒体和细胞胞浆成分。加入分离溶液，匀浆破碎组织细胞，经过数次800g和12000g离心，在60分钟内即可分离出完整的线粒体和胞浆成分。制备的线粒体具有很高的生物学活性，可进行各种功能研究如酶学测定，更可用于Western Blot,2D-胶、线粒体蛋白或DNA提取、蛋白质组学等研究。严格按照说明操作，总是能制备获得高纯度线粒体。一篇方法学研究论文发现，用普利莱试剂盒制备线粒体的得率、活性、纯度优于蔗糖密度梯度离心法和Invotrogen/Pierce线粒体提取试剂盒方法。

特点：

1、 操作简单，可在一小时内完成。

2、 实验室常规设备即可，无需超速离心。

3、 制备的线粒体具有高活性，可用于后续的各类实验分析。

规格：

50次 100次

储存：

−20°C 一年有效

操作步骤：（注意：以下所有操作均在4°C进行）

1. 样品处理：组织匀浆：取100~200mg新鲜组织样品，剪为0.5cm2的碎块放入玻璃匀浆器内。加入1.5mL冰预冷的MitoSolution。研磨组织20次。培养细胞匀浆：800g5min离心收集细胞。单次提取需2-5×107个细胞。加入1.5 mL冰预冷MitoSolution重悬细胞，将细胞悬液转移到小容量玻璃匀浆器内研磨细胞30次。

2. 将匀浆液转移到离心管中,800g,4ºC离心5min。

3. 取上清液。再次800g,4ºC 离心5min。

4. 将上清液转移到新的离心管。10,000g,4ºC离心10min。线粒体沉淀在管底。离心后的上清含胞浆成分，可收集用于对照实验。

5. 洗涤线粒体：加入0.2mLMitoSolution，轻弹管底重悬线粒体沉淀；12,000g,4ºC离心10min弃上清，线粒体沉淀在管底。

6. 重悬线粒体：可以用MitoSolution重悬线粒体沉淀,也可以用合适后续实验的自备缓冲液来裂解线粒体沉淀，具体用量是：约每100mg组织提取的线粒体用50µl，约每5×107个细胞提取的线粒体用100µl.用量请根据组织或细胞类型进行微调。

7. 裂解线粒体后，进行蛋白浓度测定。立即使用或−70ºC保存。